地球-65,蜘蛛女格溫(海莉·斯坦菲爾德 Hailee Steinfeld 配音)因爲好友彼特之死而充滿愧疚,而父親對蜘蛛俠的誤解也讓她倍感焦慮。某次行動中,格溫結識了來自其他宇宙的同伴米圭爾·奧哈拉和傑西卡·德魯。從他們口中得知,爲了防止多元宇宙進一步崩壞,米圭爾策劃成立了由蜘蛛俠中的精英組成的突擊隊。格溫受邀加入他們,並利用時空穿梭的機會來到了地球-1610,見到久違的邁爾斯(沙梅克·摩爾 Shameik Moore 配音)。此時的邁爾斯和父母關係緊張,他憧憬格溫,渴望加入突擊隊又遭到拒絕。
隨後邁爾斯又聽到一個可怕的消息,每一個宇宙中,失去至親正是所有蜘蛛俠的可悲宿命……